布魯氏菌檢測試劑盒利用實時熒光PCR原理,主要用于布魯氏菌的定性篩查檢測。針對布魯氏菌基因設計特異性引物和分子信標探針,在待檢樣本中含有布魯氏菌DNA的情況下,PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應熒光信號進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結果的定性分析。
布魯氏菌檢測試劑盒檢驗方法:
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條,設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,置37℃反應30分鐘。
5.扣去孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,拍干。
6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應30分鐘。
7.洗滌,扣去孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,拍干。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調零,于450nm測定各孔吸光值。
布魯氏菌檢測試劑盒正確使用注意:
1.準備過程,試劑操作準備的不當很可能影響酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA結果。
2.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。
3.洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
4.一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
5.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。
6.如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定。