孔雀石綠ELISA檢測試劑盒的操作步驟包括以下幾個環(huán)節(jié):
1.準(zhǔn)備試劑:確保所有試劑回溫至室溫,并搖勻。
2.微孔板處理:取出所需數(shù)量的微孔板,未使用的應(yīng)保存于2~8℃的環(huán)境中。
3.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋:按照說明書準(zhǔn)備6個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,通常從高到低進(jìn)行系列稀釋。
4.加樣:在酶標(biāo)板上設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)品孔,加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,建議每個濃度做2個平行孔。
5.競爭反應(yīng):加入樣本后,樣本中的孔雀石綠與微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗孔雀石綠抗體。
6.洗滌:去除未結(jié)合的物質(zhì),保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。
7.加入酶標(biāo)記物:與抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)記物復(fù)合物。
8.底物顯色:加入TMB底物進(jìn)行顯色反應(yīng),樣本吸光度值與孔雀石綠含量成負(fù)相關(guān)。
9.測定吸光度:使用酶標(biāo)儀測定各孔的吸光度值。
10.計(jì)算結(jié)果:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線比較,得出樣本中孔雀石綠的含量。
1.嚴(yán)格按照說明書的步驟進(jìn)行操作,避免交叉污染。
2.使用前確保試劑沒有過期,且儲存條件符合要求。
3.加樣時要注意精確度,避免產(chǎn)生氣泡,以免影響結(jié)果。
4.洗滌時要徹,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
5.在操作過程中要防止光線直射,避免影響顯色反應(yīng)。
6.使用后的試劑和廢棄物要按照生物安全規(guī)定處理,避免環(huán)境污染。